感受态细胞是指经过特殊处理的细胞,具备能够高效吸收外源DNA的能力。常见于分子生物学实验中,尤其是基因克隆和转化实验中。感受态细胞通常用于将外源DNA,如质粒或其他遗传材料,导入细胞中。这一过程被称为转化。
感受态细胞的特征:
1.高效转化能力:感受态细胞能够通过其细胞膜吸收外源DNA,这对于基因工程或克隆技术至关重要。未经处理的细胞通常不能有效地吸收外源DNA。
2.暂时性改变的细胞膜:细胞膜的结构被暂时改变,允许DNA分子通过。这种改变通常是通过化学或电击方法(如电击转化)来实现的。
感受态细胞的制备:
1.化学法(氯化钙法):
使用氯化钙(CaCl₂)等化学试剂处理细胞,使其膜对DNA分子具有暂时的通透性。氯化钙通过与细胞膜相互作用,增加细胞膜的流动性,从而帮助外源DNA进入细胞。
步骤:将细胞生长至对数生长期后,收集并在低温条件下处理(如在冰上加入氯化钙溶液),然后使细胞在温度激增(如42℃热冲击)下进行转化。
2.电击法(电转化):
通过应用电场使细胞膜产生微小的孔隙,使外源DNA能够进入细胞。电转化法通常比化学法更为高效,尤其适用于一些难以转化的细胞类型。
步骤:将细胞与外源DNA混合后,放入电转化仪中,应用短暂的高电压脉冲,使细胞膜暂时变得透过DNA。
常见感受态细胞类型:
1.大肠杆菌(E. coli):z常见的感受态细胞,广泛应用于分子克隆、基因表达、基因编辑等实验中。
2.酵母细胞:在酿酒和基因克隆中也有应用,酵母细胞可以通过电转化或化学法制备成感受态。
3.其他细菌和真菌:除了大肠杆菌,其他细菌和一些真菌(如假单胞菌)也可以被制成感受态。
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感受态细胞常见类型