酶联免疫试剂盒实验中每一个步骤都尤为重要,细节不容忽视,它是实验成功的关键与否;在这里我司为方便各位了解,较好的完成实验。
原理概述
酶联免疫试剂盒的检测原理基于酶联免疫吸附测定(ELISA)技术。该技术巧妙地将抗原抗体反应与酶催化反应相结合,通过一系列精密的化学反应过程,实现对目标分子的检测。具体而言,ELISA试剂盒通过固相载体(如聚苯乙烯微孔板)上的抗原或抗体与待测样本中的目标分子发生特异性结合,随后加入酶标记的二抗,形成抗原-抗体-酶复合物。在底物存在的情况下,酶催化底物发生化学反应,产生颜色变化,颜色的深浅与目标分子的浓度成正比,从而实现对目标分子的定量或定性检测。
酶联免疫试剂盒的标本处理:
1.实验前应预测标本含量,如果标本浓度过高,应对标本进行稀释,使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。标本使用0.01mol/L的PBS稀释(PH=7.0-7.2);
2.若所检样本不包含在说明书所列样本之中,建议进行预实验验证其有效性,并注意留存样本;
3.使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差;
4.若样本为细胞培养上清,因该类样本干扰因素较多,如:细胞状态、细胞数量、采样时间等,所以可能存在检测不出的情况;
5.某些天然蛋白或重组蛋白,包括原核及真核重组蛋白,可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配,而不被检测出;
6.建议使用新鲜样本,保存时间过长可能会存在蛋白降解或变性导致实验结果偏差。
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酶联免疫试剂盒的标本处理